text: 雙光子激發顯微鏡是一種熒光成像技術，可以對活體組織進行深度約1毫米的成像。 它不同於傳統的熒光顯微鏡，其中激發波長短於發射波長，因為兩個激發光子的波長長於所得發射光的波長。 雙光子激發顯微術通常使用近紅外激發光，其也可以激發。 然而，對於每次激發，兩個光子的紅外光被吸收。 使用紅外線可最大限度地減少組織中的散射。 由於多光子吸收，背景訊號被強烈抑制。 這兩種效果都會導致這些顯微鏡的穿透深度增加。 由於其更深的組織穿透，有效的光檢測和減少的光漂白，雙光子激發可以是共聚焦顯微鏡的優越替代品。藉助於強聚焦鐳射束，產生非線性光學效應，其基於同時到達一個分子中的若干光子一致。多光子顯微鏡的操作類似於共聚焦鐳射掃描顯微鏡的操作。 然而，雖然共聚焦鐳射掃描顯微具有50-80 μm的穿透深度，取決於製劑，可以與多光子顯微鏡一起使用更深的區域，例如，200 μm，在非常有利的情況下甚至可達到1000 μm。 活體組織的這一影象可能是用其它方法無法成像。概念.雙光子激發採用雙光子吸收，這一概念首先由瑪麗亞·格佩特-梅耶於1962年在銫蒸氣中表明，雙光子激發單個原子是可能的。雙光子激發熒光顯微鏡與共聚焦鐳射掃描顯微鏡具有相似性。開發.雙光子顯微鏡由溫弗裡德·登克(Winfried Denk)和James Strickler於1990年在康奈爾大學的瓦·韋伯(Watt W. Webb)實驗室開創並獲得專利。他們將雙光子吸收的概念與使用鐳射掃描器相結合。在雙光子激發顯微鏡中，紅外鐳射束透過物鏡聚焦。 通常使用的鈦-藍寶石激發鐳射具有大約100飛秒的脈衝寬度和大約80MHz的重複率，允許兩個光子吸收所需的高光子密度和通量，並且可以在寬波長範圍內調節。 具有325fs脈衝的鎖模的Yb摻雜光纖鐳射器也已用於膠原成像，證明膠原蛋白的穿透深度超過320μm，這相當於當耦合到傳統鈦-藍寶石激發鐳射時可實現的250-300 μm的深度 。
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